Validação de um sistema para análise funcional de genes em Phakopsora pachyrhizi via silenciamento gênico mediado por aplicação ectópica de dsRNA
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Data
2018-07-31
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Universidade Estadual do Norte do Paraná
Resumo
O mecanismo de silenciamento gênico (RNAi) mediado pela aplicação direta de dsRNA vemse tornando uma estratégia promissora tanto para a análise funcional de genes quanto para ocontrole de pragas e patógenos. Embora ainda não se conheça a maquinaria de silenciamentode Phakopsora pachyrhizi, a possibilidade de uso desse sistema para um fungo biotrófico comalto poder destrutivo sobre a soja, uma das principais commodities mundiais, se tornaespecialmente atrativa. Nós realizamos a pulverização direta de GFP-dsRNA em folhasdestacadas de soja e observamos que o dsRNA é absorvido pelas folhas e permanece sendodetectado nas mesmas ao longo de todo o ciclo de infecção do fungo, sendo ainda transmitidopara a primeira geração de esporos. Foi possível observar ainda que os GFP-dsRNA sãoprincipalmente observados no tubo germinativo dos esporos. Posteriormente utilizamos comoalvo um candidato a gene essencial para o desenvolvimento de P. pachyrhizi (de_novo_4692)e observamos um efeito de silenciamento dose dependente de 86,6%, sendo o máximo efeitodetectado na menor dose utilizada (50 ng/μL). O ensaio de fenotipagem para a severidade dadoença nas folhas destacadas silenciadas mostrou significativa redução nos sintomas dadoença. Tais resultados indicam que a aplicação direta de dsRNA sobre as folhas é eficaz eminduzir o silenciamento de genes alvo no fungo sugerindo portanto que essa estratégia possuipotencial para ser utilizada em estudos funcionais e ainda possa representar uma alternativapotencial e inovadora com relação ao uso de fungicidas.
Descrição
Palavras-chave
RNAi, Ferrugem Asiática, Soja, Aplicação exógena, dsRNA
Citação
COSTA, Roberta de Paula Saturnino. Validação de um sistema para análise funcional de genes em Phakopsora pachyrhizi via silenciamento gênico mediado por aplicação ectópica de dsRNA. Orientadora: Mayra Costa da Cruz Gallo de Carvalho. 2018. 48 p. Dissertação (Mestrado em Agronomia) – Centro de Ciências Agrárias, Campus Luiz Meneghel, Universidade Estadual do Norte do Paraná, Bandeirantes, 2018.