Validação de um sistema para análise funcional de genes em Phakopsora pachyrhizi via silenciamento gênico mediado por aplicação ectópica de dsRNA

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dc.contributor.advisor1Carvalho, Mayra Costa da Cruz Gallo de
dc.contributor.advisor1IDhttps://orcid.org/0000-0002-1559-3828
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2844751503530944
dc.contributor.referee1Carvalho, Mayra Costa da Cruz Gallo de
dc.contributor.referee1IDhttps://orcid.org/0000-0002-1559-3828
dc.contributor.referee1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2844751503530944
dc.contributor.referee2Torres, João Pereira
dc.contributor.referee2IDhttps://orcid.org/0000-0002-7306-9872
dc.contributor.referee2Latteshttp://lattes.cnpq.br/2582950118304206
dc.contributor.referee3Carvalho, Kenia de
dc.contributor.referee3Latteshttp://lattes.cnpq.br/6278825285024494
dc.contributor.referee4Seiva, Fábio Rodrigues Ferreira
dc.contributor.referee4IDhttps://orcid.org/0000-0002-7461-8773
dc.contributor.referee4Latteshttp://lattes.cnpq.br/2646377436835972
dc.contributor.referee5Carvalho, Sandremir de
dc.contributor.referee5Latteshttp://lattes.cnpq.br/8684697240694261
dc.creatorCosta, Roberta de Paula Saturnino
dc.creator.Latteshttp://lattes.cnpq.br/8630574520186496
dc.date.accessioned2025-03-28T13:37:07Z
dc.date.available2025-03-28T13:37:07Z
dc.date.issued2018-07-31
dc.description.abstractO mecanismo de silenciamento gênico (RNAi) mediado pela aplicação direta de dsRNA vemse tornando uma estratégia promissora tanto para a análise funcional de genes quanto para ocontrole de pragas e patógenos. Embora ainda não se conheça a maquinaria de silenciamentode Phakopsora pachyrhizi, a possibilidade de uso desse sistema para um fungo biotrófico comalto poder destrutivo sobre a soja, uma das principais commodities mundiais, se tornaespecialmente atrativa. Nós realizamos a pulverização direta de GFP-dsRNA em folhasdestacadas de soja e observamos que o dsRNA é absorvido pelas folhas e permanece sendodetectado nas mesmas ao longo de todo o ciclo de infecção do fungo, sendo ainda transmitidopara a primeira geração de esporos. Foi possível observar ainda que os GFP-dsRNA sãoprincipalmente observados no tubo germinativo dos esporos. Posteriormente utilizamos comoalvo um candidato a gene essencial para o desenvolvimento de P. pachyrhizi (de_novo_4692)e observamos um efeito de silenciamento dose dependente de 86,6%, sendo o máximo efeitodetectado na menor dose utilizada (50 ng/μL). O ensaio de fenotipagem para a severidade dadoença nas folhas destacadas silenciadas mostrou significativa redução nos sintomas dadoença. Tais resultados indicam que a aplicação direta de dsRNA sobre as folhas é eficaz eminduzir o silenciamento de genes alvo no fungo sugerindo portanto que essa estratégia possuipotencial para ser utilizada em estudos funcionais e ainda possa representar uma alternativapotencial e inovadora com relação ao uso de fungicidas.
dc.description.resumoThe mechanism of gene silencing (RNAi) mediated by the direct application of dsRNA hasbecome an interesting strategy for both, the functional analysis of genes and for the control ofpests and pathogens. Although the silencing machinery of Phakopsora pachyrhizi is not yetknown, the possibility of using this system for a obligated biotrophic fungus with highdestructive power over soybeans, one of the main world commodities, becomes especiallyattractive. We performed the direct spray of GFP-dsRNA on soybean detached leaves andobserved that the dsRNA is absorbed by the leaves and remains being detected in the sameones throughout the cycle of infection of the fungus, being still transmitted to the firstgeneration of spores. It was also possible to observe that the GFP-dsRNA is mainly observedin the sperm germinal tube. We then targeted a gene predicted to be essential for thedevelopment of P. pachyrhizi (de_novo_4692) and observed a dose-dependent silencingeffect of up to 86,6%, being the highest effect detected at the lower dose used (50 ng/μL). Thephenotype assay for disease severity in the silenced detached leaves showed a significantreduction in the symptoms of the disease. These results indicate that the direct application ofdsRNA on leaves is effective in inducing the silencing of target genes in the fungus,suggesting that this strategy can be used for functional studies and still represent a potentialalternative to the use of fungicides.
dc.description.sponsorshipCAPES
dc.identifier.citationCOSTA, Roberta de Paula Saturnino. Validação de um sistema para análise funcional de genes em Phakopsora pachyrhizi via silenciamento gênico mediado por aplicação ectópica de dsRNA. Orientadora: Mayra Costa da Cruz Gallo de Carvalho. 2018. 48 p. Dissertação (Mestrado em Agronomia) – Centro de Ciências Agrárias, Campus Luiz Meneghel, Universidade Estadual do Norte do Paraná, Bandeirantes, 2018.
dc.identifier.urihttps://repositorio.uenp.edu.br/handle/123456789/485
dc.languagepor
dc.publisherUniversidade Estadual do Norte do Paraná
dc.publisher.countryBrasil
dc.publisher.departmentUENP/CLM::CCA
dc.publisher.initialsUENP
dc.publisher.programPPAGRO
dc.subjectRNAi
dc.subjectFerrugem Asiática
dc.subjectSoja
dc.subjectAplicação exógena
dc.subjectdsRNA
dc.subject.cnpqAgronomia
dc.subject.cnpqCiências Agrárias
dc.titleValidação de um sistema para análise funcional de genes em Phakopsora pachyrhizi via silenciamento gênico mediado por aplicação ectópica de dsRNA
dc.title.alternativeValidation of a system for functional analysis of genes in Phakopsora pachyrhizi through ectopic application of dsRNA
dc.typeDissertação
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